PCR-aaral: ano ito? Paano upang gawin ang PCR pagtatasa

Ito ay hindi kaya matagal na ang nakalipas nakapagpaunlad ng maaasahang, mataas na sensitibo at mabilis na paraan para sa diagnosis ng iba't-ibang mga nakakahawang sakit sa mga tao. Ang ganitong pamamaraan ay tinatawag na "PCR pagtatasa". Ano ito, kung ano ang kanyang kakanyahan, kung ano ang maaari niyang makilala microorganisms at kung paano dalhin ito, kami ay naglalarawan sa artikulong ito.

Kasaysayan ng pagtuklas

Imbento ng polymerase chain reaction (PCR) ay isang Amerikanong siyentipiko Keri Myullis sa 1983. Sa una, ang patentadong paraan ng diagnosis sa pamamagitan ng "Cetus Corporation," kung saan siya nagtrabaho at ang tagalikha nito. Ngunit noong 1992 lahat ng karapatan at mga patente mga naipagbili sa mga kumpanya "Hoffman-La Roche." Pagkatapos nito, ito naka-out na ang mga katulad na pag-aaral ay natupad kahanay at ay iniulat sa pamamagitan ng iba pang mga biologist US, tulad ng Elis Chen, David Edgar, John RRE. Sa 1980 siya ay nakikibahagi sa ang isyu na ito at ang Sobiyet siyentipiko A. Slyusarenko A. Kaledin at S. Gorodetsky. Samakatuwid, upang matukoy ang nag-iisang may-ari ng copyright ay hindi pa posible. Maraming mga hindi pa nababayarang biochemists nag-ambag sa pag-unlad ng mga pamamaraan ng polymerase reaksyon at CERN patented ang kanilang mga makabagong-likha. Sa puntong ito pagtatasa ng PCR ay isinasagawa sa buong espesyal na gamit na laboratoryo.

SUMMARY PCR diagnostic

PCR-aaral: ano ito at kung paano ito gumagana? Ang kakanyahan ng ang paraan ay namamalagi sa ang katunayan na sa pamamagitan ng paggamit ng isang espesyal na enzyme DNA polymerase sa vitro upang mapataas sa dami tiyak microbial kapaligiran. Upang gawin ito nang paulit-ulit multiply available DNA materyal. Kaya, ang presensya ng isang pathogen sa isang sample ang halaga ay nadagdagan sa kapinsalaan ng biochemical laboratoryo pagmamanipula, at bakterya ay hindi magiging mahirap na matagpuan sa mikroskopyo.

Paano ay ang pag-aaral ng materyal?

Upang isagawa ang pag-aaral na kailangan:

• Ang template DNA;
• primers materyal pagkonekta dulo ng fragment;
• matatag sa init DNA polymerase enzyme;
• kemikal, matiyak ang wastong pagpapatakbo ng enzymes;
• buffer solusyon ay kinakailangan para sa paglikha ng mga naaangkop na mga kondisyon para sa paglago at pag-unlad ng DNA materyal.

Upang magsagawa ng PCR gumana 25-30 umuulit na binubuo ng tatlong hakbang: denaturation, pagsusubo at pagpahaba.

Upang pag-aralan polimezarnoy chain reaction gamit ang isang espesyal na aparato - siklista. Modernong kagamitan ay nagbibigay-daan sa iyo upang i-install ng mga kinakailangang pag-init at paglamig tubes programa upang puksain ang mga error sa panahon ng pagsusuri.

Kung saan upang ilapat ang diagnosis?

Polimezarnoy paraan ng chain reaction ay ginagamit sa iba't-ibang larangan ng medisina:

• Forensic paggamit ng ito upang makilala ang genetic na materyal, tulad ng buhok, laway o dugo;
• PCR pagtatasa ng dugo ay nakakatulong upang genotyping, hal para sa pagtuklas ng mga indibidwal na genetic nakatanim bilang tugon sa isang partikular na gamot;
• sa pamamagitan ng paraan ng set relasyon ng pamilya pagitan ng mga tao;
• pinaka na hinahangad-PCR pamamaraan ay naging sa mga medikal na pagsusuri para sa pagpapasiya ng iba't-ibang mga nakakahawang sakit.

Ano ang mga impeksiyon ay nagpapakita PCR?

Kaya, medicine ay matagal na matagumpay na ginamit PCR pagtatasa. Ano ito, na namin natutunan. At ilang pathogens ay maaaring napansin sa mga ito? PCR diagnosed sumusunod na mga impeksiyon :

• hepatitis A, B, C;
• ureaplasmosis;
• candidiasis;
• chlamydia;
• mycoplasmosis;
• bacterial vaginosis;
• nakakahawa mononucleosis;
• trichomoniasis;
• HPV impeksiyon;
• tuberculosis;
• herpes impeksyon ng ika-1 at ika-2 uri;
• Helicobacter pylori impeksiyon;
• cytomegalovirus;
• diphtheria;
• salmonellosis;
• HIV infection.

Gayundin, PCR pamamaraan ay ginagamit sa diagnosis ng kanser.

bentahe ng ang paraan

Diagnostic PCR ay may ilang mga pakinabang:

1. Mataas na sensitivity. Kahit na may lamang ng ilang DNA molecule microorganism PCR pagtatasa ay tumutukoy sa pagkakaroon ng infection. Ito ay tumutulong na pamamaraan para sa talamak at tago sakit na nagaganap. Kadalasan sa ganitong mga kaso, ang mga mikroorganismo ay nalilinang sa ibang mga paraan.
2. Upang siyasatin ang anumang angkop na materyal, gaya ng laway, dugo, sekswal na pagpili, buhok, epithelial cell. Ang pinaka-karaniwang ay isang pagsubok ng dugo at urogenital pamunas PCR.

3. Hindi nangangailangan ng isang pinalawig na lumalagong kultura. Ang mga automated na proseso ng diagnostic ay nagbibigay-daan upang makakuha ng mga resulta ng isang pag-aaral pagkatapos ng 4-5 na oras.
4. Ang pamamaraan ay halos ganap na tunay. Naitatala lamang ihiwalay kaso ng maling-negatibong resulta.
5. Kakayahang upang makilala ang ilang mga uri ng pathogens sa isang sample na materyal. Hindi lang pinapabilis ang proseso ng diagnosis ng sakit, ngunit din makabuluhang binabawasan materyal na mga gastos. Kadalasan, ang mga doktor ay nagreseta ng isang komprehensibong pagsusuri ng mga PCR. Presyo survey, na binubuo ng pagtukoy ng anim na pathogens, ay tungkol sa 1,500 Rubles.

Mga rekomendasyon sa paghahanda para sa pag-aaral

Ang mga resulta na may-bisa ang PCR-aaral na kailangan upang masuri, ng pagsunod sa mga rekomendasyon ng mga paunang paghahanda para sa diagnosis:

1. Bago paghahatid ng laway ay dapat pigilin ang sarili mula sa pagkain at gamot para sa 4 na oras bago ang pagsa-sample ng materyal. Kaagad bago ang pamamaraan, banlawan ang iyong bibig na may pinakuluang tubig.
2. Ang mga patakaran sa itaas ay dapat magabayan at kapag paglalaan ng sample mula sa loob ng pisngi. Pagkatapos anlaw ay inirerekomenda upang magsagawa ng isang ilaw massage sa balat upang palabasin prostatic secretions.
3. Ihi ay karaniwang tinipon sa bahay. Upang gawin ito, kailangan mong magsagawa ng isang masusing toilet ng maselang bahagi ng katawan. Sa isang sterile plastic container ay kinakailangan upang mangolekta ng 50-60 ml ng ihi. Ito ay inirerekomenda para sa mga kababaihan upang ipasok ang maliit na bilo sa puki, at lalaki hangga't maaari upang hilahin ang balat kulungan ng mga tupa upang matiyak ang kadalisayan ng materyal. Hindi ka maaaring kumuha ng materyal sa panahon regla.
4. Para sa paghahatid ng tamud upang abstain mula sa iyutan sa panahon ng 3 araw bago ang koleksyon ng mga materyales. Gayundin, mga doktor ay pinapayuhan na abandunahin ang paggamit ng sauna at hot bath, alak at maanghang na pagkain. Para sa 3 oras bago ang pag-aaral ay kinakailangan upang pigilin ang sarili mula sa pag-ihi.
5. Upang pass urogenital pahid, halimbawa, kung ang pag-aaral sa isang chlamydia PCR, ang parehong mga kababaihan at kalalakihan ay ang inirerekumendang na ang sekswal natitira para sa 3 araw. 2 linggo bago ang pag-aaral ay hindi maaaring kumuha ng antibiotics. Para sa isang linggo kailangan mong ihinto ang paggamit ng intimate gels, ointments, vaginal suppositories, irigasyon. 3 oras bago ang pag-aaral ay dapat pigilin ang sarili mula sa pag-ihi. Sa panahon ng regla bakod materyal ay hindi natupad, lamang 3 araw pagkatapos ng pagwawakas ng pagtutuklas ay maaaring tumagal ng urogenital pahid.

PCR sa panahon ng pagbubuntis

Ang panahon ng paghihintay para sa isang sanggol, maraming mga nakakahawang sakit, sexually transmitted diseases, ay lubhang mapanganib para sa mga normal na pangsanggol pag-unlad. STDs ay maaaring palitawin intrauterine pag-unlad, pagkakuha o napaaga kapanganakan, sapul sa pagkabata malformations sa mga bata. Samakatuwid, ito ay mahalaga upang makakuha ng sa unang bahagi ng pagbubuntis pag-screen ng PCR. Pumasa sa pag-aaral ay kinakailangan kapag nagrerehistro - hanggang sa 12 na linggo.

Bakod materyal ay mula sa servikal kanal na may isang espesyal na brushes. Ang pamamaraan ay walang kahirap-hirap at poses walang panganib sa mga sanggol. Karaniwan sa panahon ng pagbubuntis aralan na para sa chlamydia PCR pamamaraan, pati na rin ang ureaplasmosis, mycoplasmosis, cytomegalovirus, herpes, papillomavirus. Ang ganitong mga pagsusuri complex na tinatawag PCR 6.

PCR para sa diagnosis ng HIV

Dahil sa ang katunayan na ang paraan ng polymerase kadena reaksyon ay napaka-sensitibo sa mga pagbabago sa katawan at ang mga kondisyon ng diagnosis, maraming mga kadahilanan ay maaaring makaapekto sa kinalabasan. Samakatuwid PCR pagtatasa para sa HIV impeksyon ay hindi isang maaasahang paraan, ang kanyang kahusayan - 96-98%. Ang natitirang 2-4% ng mga pagsubok ay nagbibigay sa false positive na resulta.

Ngunit sa ilang mga sitwasyon na walang PCR diagnosis ng HIV ay hindi maaaring gawin. Karaniwan, ito ay isinasagawa sa mga taong may maling-negatibong ELISA. Ang mga numero ay nagpapahiwatig na ang tao ay hindi pa binuo antibodies sa virus at hindi maaaring napansin nang hindi tinataasan ang bilang ng maramihang. Na ito ay maaaring nakamit sa pamamagitan ng pagsasagawa ng isang dugo pagsubok PCR pamamaraan.

Gayundin kailangan ay isang diagnosis ng mga bata unang taon ng buhay, ipinanganak sa HIV-positive mga ina. Ang pamamaraan ay ang tanging paraan upang mapagkakatiwlaan matukoy ang katayuan ng mga bata.

PCR para sa diagnosis ng hepatitis

Polymerase pamamaraan chain reaction nagbibigay-daan sa pagtuklas ng DNA ng virus ng hepatitis A, B, C, well bago ang pagbuo ng antibodies sa impeksiyon o sintomas simula. Partikular na epektibo ay ang PCR pagsusuri sa hepatitis C, dahil 85% ng naturang sakit ay asymptomatic at walang napapanahong paggamot ay nagiging talamak.

Napapanahong pag-detect ng pathogen ay makakatulong sa maiwasan ang mga komplikasyon at pang-matagalang paggamot.

Integrated PCR screening

Comprehensive PCR Pagtatasa: ano ito? Ito screening pamamaraan polimezarnoy chain reaction na may kasamang pagtukoy nang sabay-sabay ang ilang mga species infection: Mycoplasma genitalium, Mycoplasma Hominis, Gardnerella vaginalis, Candida, trichomoniasis, cytomegalovirus, Ureaplasma urealitikum, herpes ika-1 at ika-2 uri, gonorrhea papillomavirus. Ang presyo ng diagnosis na ito saklaw mula sa 2,000 sa 3,500 Rubles. depende sa klinika, mga materyales at kagamitan, pati na rin sa uri ng pag-aaral: mapaghambing o dami. Kung ano ang kinakailangan sa iyong kaso - ang doktor ay nagpapasya. Sa ilang mga kaso, maaari mo lamang i-detect ang presensya ng pathogen sa iba, gaya ng HIV, ang mga mahalagang papel na nilalaro ng nabibilang na titer. tinutukoy bilang "PCR pagtatasa ng 12" sa diagnosis ng lahat ng sa itaas pathogens na pagsusuri sa.

Deciphering ang mga resulta ng pagtatasa

Transcription PCR pagtatasa ay prangka. May mga lamang 2 index scale - ". Negatibong" "positive" at Sa pagtuklas ng pathogen ay maaaring mga doktor na may 99% kumpyansa -ika kumpirmahin ang pagkakaroon ng mga sakit at upang simulan ang paggamot ng mga pasyente. Sa dami paraan ng pagtukoy ng impeksyon sa isang kaukulang haligi index number ng nakitang bakterya ay tinukoy. Tanging isang doktor ay maaaring matukoy ang lawak ng sakit at mag-atas ng mga kinakailangang paggamot.

Sa ilang mga kaso, halimbawa sa pagtukoy HIV infection sa pamamagitan ng PCR, na may isang negatibong resulta, mayroong isang pangangailangan para sa karagdagang mga survey upang kumpirmahin ang mga figure.

Saan magpasuri?

Saan ipasa-PCR pagtatasa sa mga pampublikong klinika o pribadong laboratoryo? Sa kasamaang palad, sa mga munisipal na mga medikal na institusyon na kagamitan at mga pamamaraan ay madalas na sa uso. Samakatuwid ito ay mas mahusay upang bigyan ang kagustuhan sa mga pribadong laboratoryo na may mga modernong kagamitan at lubos na kwalipikadong tauhan. Sa karagdagan, sa isang pribadong klinika sa makuha mo ang mga resulta magkano ang mas mabilis.

Sa Moscow, maraming mga pribadong laboratoryo nag-aalok ng PCR pagtatasa para sa iba't-ibang mga impeksyon. Halimbawa, sa naturang klinika bilang "Vita", "Integrated Clinic," "Happy Family", "Uro-Pro", natupad PCR pagtatasa. Survey presyo ay 200 Rubles. para sa pagpapasiya kung ang isang pathogen.

Ito ay maaaring concluded na ang diagnosis ng mga nakakahawang sakit sa pamamagitan ng PCR sa karamihan ng mga kaso ay isang mabilis at maaasahang paraan ng tiktik ang pathogen sa katawan sa maagang yugto ng impeksiyon. Ngunit, sa ilang mga kaso, upang pumili ng iba pang mga pamamaraan ng diagnosis. Tukuyin ang pangangailangan para sa naturang pag-aaral ay maaari lamang maging isang espesyalista. PCR pagtatasa Decryption ay nangangailangan din ng isang propesyonal na diskarte. Sundin ang payo ng iyong doktor at huwag ibigay ang kanilang sariling mga pagsusulit, na kung saan ay hindi kinakailangan.